SUPERVISOR
Cyrus Ghobadi
سیروس قبادی (استاد راهنما)
STUDENT
Akram Auobi
اکرم ایوبی نجف آبادی
FACULTY - DEPARTMENT
دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1388
TITLE
Microprpagation of Lemon Verbena (Lippia citriodora) and Application of Methyl Jasmonate and Salicylic Acid on Increasing of Secondary Metabolism
Microprpagation of Lemon Verbena ( Lippia citriodora ) and Application of Methyl Jasmonate and Salicylic Acid on Increasing of Secondary Metabolism Akram Auobi Akram_auoby @yahoo.com Date of submission:May20, 2012 Department of Horticultural Science Isfahan University of Technology, Isfahan 84156-83111, Iran Degree: M.Sc Language: Farsi C. Ghobadi, Ph. D., Assist. Professor (Supervisor), cyrus@cc.iut.ac.ir Plants have been used as medicines throughout history and are main sources for medicine and pharmacy in most of the world. According to statistics reported by World Health Organization (WHO), the plants are one of the most important medicine sources for the man. produced plant Based Drugs, are types of Secondary Metabolites. Secondary metabolites are chemicals produced by plants under unnatural conditions. Lippia citrodora is a perennial plant and belongs to verbenaceae family. Sedative and Antibacteria effects are properties of this herb. This plant has antioxidant, antimicrobial and antitumore properties due to phenolic compounds (flavonoids and phenolic acids) and terpenoids. The leaves are very aromatic and has frequently applied as a tea. This plant has several essential oil and Its main components include cineol, Neral and Lymonen. Based on the medicinal importance of Lippia citrodora , the study was performed to propagation by tissue culture and increase of secondary metabolites. This study Was conducted in two experiments. In first experiment, tissue culture of Lippia citrodora with two type of explants (node and shoot tip) and 16 hormonal combination (consist of 0, 0.1 0.3 and 0.5 NAA and 0, 1, 2 and 4 BAP) with four replications was studied. The shoot number, shoot length, node and leaf number, internode length, callus and root formation were measured. The highest growth rate was obsereved on node explant and medium with 0.3 NAA without BAP. The results showed that hormonal combination of NAA without BAP had a positive effect on Rooting and increase of NAA to 0.3 mg enhanced Rooting and concentrations up to this, concentration caused rooting failure. Also observed that in node explant and hormonal combination of 0.1 mg l NAA, 1 mg BAP were the most effective in shoot product. the maximum length of shoots was obsereved in treatment containing 0.3 mg NAA, 0 mg BAP. In second experiment, effect of methyl jasmonate and salicylic acid was studied to increase of Secondary Metabolites in Lippia citrodora with eight treatments (0,12.5, 25 and 50 mg/l methyl jasmonate and 100, 200 and 400 mg/l salicylic acid) in three replications was studied. The Clevenger and Gas chromatography–mass (GC-Mass) were used for essence extraction and detect of essence compounds respectively. The results showed that although hormonal treatments increased some of compounds, various concentrations had different effect. The 1,8-cineole was increased in 100mg/l salicylic acid and 12.5 mg/l methyl jasmonate. The naral and genarial compounds were increase with 400mg/l salicylic acid and 12.5 mg/l methyl jasmonate respectively. Key words : Lippia citrodora , Microprpagation, Methyl jasmonate, Salicylic acid and Secondary Metabolites.
گیاهان از دیر باز منبع اصلی پزشکی و داروسازی در اکثر نقاط جهان بوده اند. طبق آمار ارائه شده از سوی سازمان بهداشت جهانی (WHO) گیاهان یکی از مهمترین منابع تامین کننده دارو برای انسان هستند.گیاهان دارویی به دلیل توأم بودن ماهیت طبیعی و وجود ترکیبات همولوگ دارویی در آنها، با بدن سازگاری بهتری دارند و معمولاً فاقد عوارض ناخواسته داروهای شیمیایی می باشند. دارو های تولید شده با منشاء گیاهی از دسته متابولیت های ثانویه می باشند. متابولیت های ثانویه موادی هستند که گیاهان در صورت مواجه شدن با محرک های غیر طبیعی در خود تولید می کنند.گیاه دارویی به لیمو Lippia citrodora یک گیاه چند ساله از خانواده Verbenaceae می باشد. این گیاه خاصیت مسکن و ضد تشنج و همچنین دارای اثر ضد باکتریایی می باشد. به لیمو به دلیل داشتن ترکیبات فلاونوئیدی، ترپنوئیدها و اسید فنولیک خاصیت آنتی اکسیدانی ضد میکروبی و ضد تومور دارد. برگ های این گیاه بسیار معطر می باشد و به عنوان چای استفاده فراوانی دارد. این گیاه دارای اسانس می باشد که مهمترین ترکیبات آن شامل سینئول، لیمونن و نرال می باشد. با توجه به اهمیت دارویی این گیاه در این تحقیق بر افزایش این گیاه از طریق کشت بافت و افزایش متابولیت های ثانویه آن مورد بررسی قرار گرفت. این پژوهش در دو بخش انجام شد. در بخش اول کشت بافت به لیمو مورد بررسی قرار گرفت. که از دو نوع ریز نمونه گره و جوانه انتهایی و 16 ترکیب هورمونی(شامل غلظت های 0، 1/0، 3/0 و 5/0 میلی گرم در لیتر هورمون NAA و 0، 1، 2 و 4 میلی گرم در لیتر هورمون BAP) در محیط کشت MS با 4 تکرارانجام شد. فاکتور های اندازه گیری شده شامل تعداد شاخه، طول شاخه، تعداد برگ ، تعداد گره، طول میان گره و تشکیل ریشه بود . بهترین نتیجه با ریز نمونه گره و ترکیب هورمونی 3/0 میلی گرم در لیتر NAA و بدون کاربرد BAP بدست آمد. نتایج نشان داد ترکیب های هورمونی NAA بدون BAP در ریشه دهی تاثیر مثبت داشتند و با افزایش میزان NAA تا 3/0 میلی گرم در لیتر ریشه دهی افزایش یافت وغلظت های بالاتر از آن باعث عدم تشکیل ریشه شد. همچنین بیشترین تعداد شاخه در ریز نمونه گره و تیمار 1/0 میلی گرم در لیترNAA + 1 میلی گرم در لیتر BAP مشاهده گردید. نتایج بدست آمده نشان داد که بیشترین طول شاخه در تیمار 3/0 میلی گرم در لیترNAA ، بدون BAP بدست آمد. در بخش دوم آزمایش به منظور بررسی تاثیر دو هورمون متیل جازمونیک و سالیسیلیک اسید بر افزایش متابولیت های ثانویه در به لیمو از 7 تیمار هورمونی شامل(0، 5/12، 25 و 50 میلی گرم در لیتر هورمون متیل جازمونات و0، 100، 200 و 400 میلی گرم در لیترهورمون سالیسیلیک اسید) با 3 تکرار استفاده شد. از دستگاه کلونجر به منظور استخراج اسانس و از دستگاه گروماتوگرافی گازی- طیف سنجی جرمی(GC-Mass) برای شناسایی ترکیبات اسانس استفاده گردید. نتایج آزمایش نشان داد که تیمار های هورمونی باعث افزایش برخی از ترکیبات شده و غلظت های مختلف تاثیر یکسانی بر ترکیبات نداشند. ترکیب 1,8-cineole در غلظت 100 میلی گرم در لیتر سالیسیلیک اسید و 5/12 میلی گرم در لیتر متیل جازمونات بیشترین تولید را داشتند. ترکیب neral در غلظت 400 میلی گرم در لیتر سالیسیلیک اسید و ترکیب geranial در غلظت 5/12 میلی گرم در لیتر متیل جازمونات بیشترین تولید را داشته است. واژگان کلیدی : به لیمو، ریز ازدیادی، متیل جازمونیک، سالیسیلیک اسید و متابولیت های ثانویه