Skip to main content
SUPERVISOR
Cyrus Ghobadi,Badraldinebrahim Seyed tabatabaei
سیروس قبادی (استاد راهنما) بدرالدین ابراهیم سیدطباطبایی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Maryam Jamshidnia
مریم جمشیدنیا

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1384

TITLE

Establishment of an Agrobacterium-Mediated Transformation System for Petunia
The commercial production of plant is growing worldwide. Its monetary value has significantly increased over the last two decades and there is a great potential for continued further growth in both domestic and international markets. Regenerated and transformed petunia plants ( Petunia hybrida cv. Supercascaide; Petunia hybrida cv. Opera; Petunia Nictaginiflora ) for Iranian and forein cultivar have been produced by means of shoot apex and leaf disc Agrobacterium -mediated transformation method. Seeds of different cultivars were grown in MS medium for regeneration via shoot apex. Shoot apex were isolated from seven days seedlings and in order to select the best shooting media, the statistical analysis explants in a CRD with 12 shooting treatments: MS + B5 vitamins with different concentration of NAA (0, 0.2, 0.5) and BAP (0, 0.1, 0.5, 1). The statistical analysis indicated that the best for producing multiple shoot, was medium with 1mg/l BAP. Optimizing regeneration via leaf disc, explants of different cultivars were put in three modified MS media and Supercascaide leaf discs were put in 10 different medium that were different in concentration and kind of growth regulators. The results showed that the best medium for direct regeneration was MS3 medium. Of course mean comparisons between media and Petunia hybrida (Opera, Supercascaide) and Petunia Nictaginiflora indicated that the best for producing direct shoot, were Nictaginiflora species and Supercascaide cultivar in MS 3 and MS 12 , respectively. The best for producing indirect shoot was Opera in MS 3 medium. The leaf disc and shoot apex were co-cultivated with Agrobacterium strain LBA4404 harboring a plasmid pBI121 was used as the vector system for transformation. pBI121 contained ?-glucuronidase ( gus ) gene as a reporter gene and pyroline 5-carboxilate synthase ( p5cs ) driven by the cauliflower mosaic virus (CaMV35S) promoter and neomycin phosphotransferase ( npt II) gene used as a selectable marker. The leaf disc and shoot apexes were transferred to selective medium containing Kanamycin (200 mg/l) and then transferred to proliferation medium (modified MS with 1 mg/l BAP). The cultures were kept at 25±2°C and 16/8 hour photoperiod under cool-white fluorescent light at 40 µmolm -2 s -1 . Shoot regeneration occurred within 3 weeks. To confirm transformation, regenerated plants were subjected to the polymerase chain reaction (PCR). GUS and proline assay confirmed the perscence of the gus and p5cs gene in the genome of all transformants in stress and nonstress conditions
صنعت گیاهان زینتی در تلاشی که برای برآورده کردن تقاضای روزافزون عموم دارد، به سرعت در حال رشد است. مهندسی ژنتیک می تواند در تولید ارقام گیاهان زینتی مطلوب نقش مهمی داشته باشد. بهینه سازی باززایی و روش انتقال ژن در گیاه اطلسی برای ارقام ایرانی و خارجی با استفاده از مریستم انتهایی و قطعات برگ از طریق اگروباکتریوم انجام گرفت. در این بررسی به منظور بهینه سازی باززایی از طریق مریستم انتهایی پس از انتخاب ارقام، بذور آن ها در محیط کشت MS کشت داده شدند و مریستم انتهایی (مریستم به همراه پریموردیا) از گیاهچه های 7 روزه جدا گردید و به منظور تعیین بهترین محیط کشت ساقه زایی در یک طرح فاکتوریل کاملاً تصادفی با 12 تیمار شاخه زایی شامل محیط کشت MS حاوی ویتامین های B 5 که دارای غلظت های مختلفی از NAA (0/0، 2/0، 5/0 میلی گرم در لیتر) و BAP (0/0، 1/0، 5/0، 1 میلی گرم در لیتر) بودند منتقل گردید و تعداد شاخه های مستقیم و غیر مستقیم یادداشت برداری شدند. تجزیه و تحلیل آماری داده ها نشان داد که تفاوت معنی داری بین غلظت های مختلف تنظیم کننده های رشد گیاهی در تولید تعداد شاخه های مستقیم و غیرمستقیم وجود دارد و BAP یک میلی گرم در لیتر بیشترین تعداد چند جوانه را تولید کرد. برای مطالعه کشت بافت از طریق قطعات برگ، ریزنمونه های برگ ارقام مختلف در سه نوع محیط کشت MS تغییریافته و قطعات برگ رقم سوپرکاسکید در 10 نوع محیط کشت مختلف که از نظر غلظت و نوع تنظیم کنند های رشد متفاوت بودند، قرار داده شدند. نتایج نشان داد که بهترین محیط کشت برای باززایی مستقیم تمام ارقام، محیط کشت MS 3 (MS حاوی ویتامین های+B5 BAP+1mg/lZea+0.1mg/l NAA (2mg/l می باشد. البته اثر متقابل رقم و محیط کشت موجب شد که رقم نیکتاجینی فلورا بیشترین تعداد شاخه مستقیم و رقم اوپرا بیشترین تعداد شاخه غیر مستقیم را در این محیط ایجاد کند. بهترین محیط کشت برای باززایی مستقیم سوپرکاسکید محیط کشت MS 12 (MS حاوی ویتامین های + BAP+0.1mg/l B5 NAA+10mg/l TDZ (2mg/l بود. به منظور بهینه سازی انتقال ژن از اگروباکتریوم LBA4404 حاوی پلاسمید pBI121 استفاده گردید. پلاسمید pBI121 حاوی ژن نشانگر بتا-گلوکورنیداز ( gus ) و ژن دلتا - پایرولین -5- کربوکسیلات سنتتاز ( p5cs ) تحت کنترل راه انداز CaMV35S و ژن نئومایسین فسفوترانسفراز ( npt II) به عنوان ژن قابل انتخاب تحت کنترل راه انداز NOS بود. مریستم انتهایی و قطعات برگ اطلسی ارقام ایرانی و خارجی با سوسپانسیون باکتری حاوی پلاسمید pBI121 آلوده شدند و در محیط کشت ویژه ساقه زایی کشت شدند. قطعات برگ و مریستم هایی که قادر بودند در محیط انتخابی حاوی کانامایسین رشد نمایند به بهترین محیط باززایی و تولید ریشه منتقل شدند. واکنش زنجیره ای پلی مراز وجود ژن gus و p5cs را در ژنوم گیاهان تراریخت تأیید کرد. آزمون هیستوشیمیایی برای تأیید بیان ژن gus وآزمون بیوشیمیایی پرولین برای تأیید بیان ژن p5cs در ژنوم گیاهان تراریخت تحت شرایط تنش سرما و غیر تنش انجام گرفت.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی