Skip to main content
SUPERVISOR
مهدی حاجیان حسین آبادی (استاد مشاور) محمدحسین نصراصفهانی (استاد راهنما) سیدامیرحسین مهدوی (استاد راهنما) رسول کوثر (استاد مشاور)
 
STUDENT
Saba Mokhtari mobarakeh
سبا مختاری مبارکه

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1394

TITLE

Effect of alpha-lipoic acid on the quality and quantity of mouse embryo treated with lipopolysaccharide befor and after implantation
The aim of this study was to evaluate the effect of alpha-lipoic acid on quantitative and qualitative of mouse embryos treated with lipopolysaccharide. For this purpose, we first studied the effective concentration of alpha-lipoic acid and lipopolysaccharide on fragmentation and blastocyst formation. The numbers of intracellular masses and trophectoderm were determined by differential staining, the mitochondrial distribution of blastocyst with Mitotracker green staining, the intracellular ROS levels in embryos, during blastocyst stages, were measured by 2?,7?-dichlorofluorescein (DCF) fluorescence assay and glutathione content indicated by cell tracker blue method. The expression of TLR-4, Nrf-2 and TNF-RI / P60 receptor in inflammatory pathways induced by the lipopolysaccharide and treated with alpha-lipoic acid was performed using the RT-PCR method. At the end, obtained embryos from experimental groups were transferred to synchronized mouse and their implantation and pregnancy rates were evaluated. The results of this study showed that the concentration of 1mg/ml of lipopolysaccharide induced free radical production (P?0.05), decreased intracellular glutathione (P?0.05), and reduced mitochondrial mass (P?0.05), then decreased the survival of mouse embryo (P?0.05). Also, this level of lipopolysaccharide increased the expression of TNF-RI/P60 receptor and Nrf-2 (P?0.05). In order to reduce the unpleasant effects of lipopolysaccharide, after determining the optimal level of 10?M alpha-lipoic acid from the tested levels (0, 1, 10 and 100 ?M), the results showed that the use of this level was able to significant reductions in the production of free radicals (P?0.05), increased glutathione content (P?0.05), improvement of mitochondrial mass (P?0.05), improved blastocyst quality (P?0.05), increased the number of ICM and TE cells (P?0.05), and finally improved the survival rate of embryos treated with lipopolysaccharide (P?0.05). Therefore, the findings of this study suggested that although using 1 mg/ml LPS could reduce the survival rate and quality of mouse embryo and reduce the implantation, adding 10 µM ALA could modulate the harmful effects of LPS on survival and implantation of embryos. Key Words Lipopolysaccharide, Alpha-lipoic acid, Embryo, Mouse, Oxidative stress
مطالعه حاضر با هدف بررسی اثر آلفالیپوئیک اسید بر شاخص های کمی و کیفی جنین های موشی تیمار شده با لیپوپلی ساکارید طراحی و اجرا گردید. به این منظور ابتدا جهت برآورد غلظت موثر آلفالیپوئیک اسید و لیپوپلی ساکارید، درصد تسهیم و تشکیل بلاستوسیست مورد بررسی قرار گرفت. سپس تعداد سلول های تروفکتودرم و توده سلولی داخلی با شیوه ی رنگ آمیزی افتراقی، توزیع میتوکندری بلاستوسیست ها با رنگ آمیزی Mitotracker green، میزان حضور رادیکال های آزاد سلولی با رنگ آمیزی DCF و محتوای گلوتاتیون با رنگ آمیزی Cell tracker blue انجام شد. میزان بیان ژن TLR-4، Nrf-2 و گیرنده TNF-RI/P60 در مسیرهای التهابی القاشده توسط لیپوپلی ساکارید و تحت تیمار آلفالیپوئیک اسید با بهره گیری از روش RT-PCR انجام پذیرفت. در انتها جنین های حاصل از گروه های آزمایشی به موش های همزمان سازی شده انتقال و درصد لانه گزینی و بارداری آن ها مورد مطالعه گرفت. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که غلظت mg/ml 1 لیپو پلی ساکارید با القا تولید رادیکال های آزاد (05/0 P?)، کاهش گلوتاتیون داخل سلولی (05/0 P?) و نیز کاهش توده میتوکندریایی سبب کاهش زنده مانی (05/0 P?) جنین موش ها گردید. همچنین این سطح از لیپوپلی ساکارید سبب افزایش بیان ژن گیرنده TNF-RI/P60 و Nrf-2 شد (05/0 P?). به منظور کاهش اثرات نامطلوب لیپوپلی ساکارید، پس از تعیین سطح بهینه 10 میکرومولار آلفالیپوئیک اسید از میان سطوح مورد آزمون (صفر، 1، 10 و 100 میکرومولار)، یافته ها نشان داد که بهره گیری از این سطح توانست به طور معناداری سبب کاهش تولید رادیکال های آزاد (05/0 P?)، افزایش میزان گلوتاتیون سلولی (05/0 P?)، بهبود توده میتوکندریایی (05/0 P?)، ارتقا کیفیت بلاستوسیت ها ، با افزایش تعداد سلول های ICM و TE (05/0 P?)، و در نهایت بهبود درصد زنده مانی جنین های تیمار شده با لیپو پلی ساکارید را فراهم آورد (05/0 P?). لذا یافته های حاضر بیانگر آن است که اگرچه استفاده از غلظت 1 میلی گرم بر میلی لیتر LPS توانست میزان زنده مانی و کیفیت جنین های موشی آزمایشگاهی را کاهش و موجب کاهش لانه گزینی گردد و 10 میکرو مولار ALA توانست با کاهش اثرات مخرب LPS میزان زنده مانی و لانه گزینه جنین ها را بهبود بخشد. کلمات کلیدی: لیپو پلی ساکارید، آلفالیپوئیک اسید، جنین، موش، استرس اکسیداتیو

ارتقاء امنیت وب با وف بومی