Skip to main content
SUPERVISOR
Mahmoud SheikhZeinodin,Sabihe Soleimanianzad
محمود شیخ زین الدین (استاد راهنما) صبیحه سلیمانیان زاد (استاد راهنما)
 
STUDENT
Marjan Majdinasab
مرجان مجدی نسب

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Doctor of Philosophy (PhD)
YEAR
1389
Lateral flow immunoassay (LFIA) is considered as a suitable diagnostic tool for the detection of mycotoxins such as ochratoxin A. In most cases, gold nanoparticles (G or Au), due to high stability, easy synthesis and easy result reading (detection with naked eyes), are used in these evaluations. In this project two labels including gold nanoparticles and fluorescent europium (III) [Eu(III)] nanoparticles (Eu) were used for OTA monoclonal antibody (OTA-mAb) conjugation. In the LFIA using Au labels the test strip was composed of four parts: a sample pad, conjugate pad, nitrocellulose membrane and an absorbent pad. Results were obtained within 15 min, and in addition to visual examination, they were read by the rapid color intensity portable strip reader. The visual and computational detection limits (vLOD and cLOD, respectively) for ochratoxin A were 0.2 and 0.25 ng mL -1 , respectively. In the assay using Eu the test strip was composed of three parts: a sample pad, nitrocellulose membrane and an absorbent pad. The results were obtained in 8 min and in addition to observation under UV light, read by a portable strip reader. The established method allows quantitative determination of OTA with limit of detection as low as 0.05 ng mL -1 in the samples. For validation, spiked samples including wheat, maize, soybean and rice were respectively assayed by two LFIA formats and a standard high performance liquid chromatography equipped with a fluorescence detector (HPLC-FLD), and good agreement of results was obtained between two methods. Keywords: Lateral flow immunoassay (LFIA); Ochratoxin A; Agro-products; Gold nanoparticles, Eu (III) nanoparticles
ارزیابی های ایمنی جریان عرضی (LFIAs) نوارهای ساخته شده از مواد حامل محتوی واکنشگر های خشک بوده که با بکار بردن نمونه سیال فعال شده، و برای اهداف تشخیصی مانند پی بردن به بارداری، نقص در اندام های داخلی، عفونت یا آلودگی با پاتوژن های ویژه، حضور ترکیبات سمی در غذای انسان، دام یا محیط و سوء مصرف داروها مورد استفاده قرار می گیرند. این ارزیابی ها همچنین به عنوان ابزار مناسبی برای تشخیص مایکوتوکسین ها از جمله اکراتوکسین A (OTA) در نظر گرفته می شوند. در این گونه ارزیابی ها در بیشتر موارد، نانوذرات طلا (G)، به واسطه پایداری بالا، سنتز آسان و خواندن آسان نتایج (تشخیص با چشم غیر مسلح)، استفاده می شوند. در این پروژه دو نوع نشانه (لیبل) شامل نانوذرات طلا و نانوذرات فلوئورسنت یوروپیوم (Eu) برای کنژوگه کردن آنتی بادی های مونوکلونال علیه اکراتوکسین A مورد استفاده قرار گرفت. ارزیابی بر اساس فرمت رقابتی طراحی شد. در ارزیابی ایمنی جریان عرضی با استفاده از نشانگر نانوذرات طلا نوارهای تست از چهار قسمت پد نمونه، پد کنژوگه، غشای نیتروسلولزی و پد جاذب تشکیل شده بودند. پس از قرار دادن نمونه روی نوار، نتایج در مدت 15 دقیقه ظاهر شد و علاوه بر ارزیابی بصری، با استفاده از دستگاه نوارخوان پورتابل که قادر به تشخیص شدت رنگ بود بدست آمد. حد تشخیص بصری و محاسباتی (به ترتیب vLOD و cLOD) برای اکراتوکسین A به ترتیب ng mL -1 2/0 و ng mL -1 25/0 بود. در ارزیابی با استفاده از نانوذرات یوروپیوم به عنوان نشانه، نوارها از سه قسمت پد نمونه، غشای نیتروسلولزی و پد جاذب تشکیل شده بودند. در این روش نتایج در مدت 8 دقیقه ظاهر شد و علاوه بر مشاهده زیر نور ماورای بنفش، به وسیله ی یک دستگاه نوارخوان پورتابل نیز بررسی می شد. در این روش، تعیین مقداری OTA با حد تشخیص کمتر از ng mL -1 05/0 امکانپذیر بود. لذا به منظور معتبر سازی این روش، نمونه های تلقیح شده با OTA شامل گندم، ذرت، سویا و برنج به ترتیب با استفاده از هر دو روش LFIA و روش استاندارد کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا و مجهز به آشکارساز فلوئورسنت (HPLC-FLD) ارزیابی شدند و تطابق خوبی بین نتایج هر دو روش بدست آمد. به طور کلی، با توجه به نیاز تکنولوژی های با حساسیت تشخیص بالا و سهولت استفاده، می توان نتیجه گیری کرد که استفاده از ترکیبات فلوئورسنت لانتانید مانند یوروپیوم، به واسطه فعالیت بالایی که دارند می توانند باعث بهبود عملکرد تکنیک LFIA شود. کلمات کلیدی: ارزیابی ایمنی جریان عرضی (LFIA) اکراتوکسین A؛ نانوذرات طلا؛ نانوذرات یوروپیوم

ارتقاء امنیت وب با وف بومی