Skip to main content
SUPERVISOR
Amir Massah,Masoud Bahar
امیر مساح (استاد راهنما) مسعود بهار (استاد راهنما)
 
STUDENT
Mojdeh Yazdani
مژده یزدانی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1389

TITLE

Molecular Identification and Grouping of Apple Stem Grooving Virus and Apple Stem Pitting Virus Isolates in Isfahan Province
Apple ( Malus domestica Borkh), a member of the rose family (Rosaceae), is one of the important fruits of cold and temperate regions in Iran. Apple stem grooving virus (ASGV, genus Capillovirus ) and Apple stem pitting virus (ASPV, genus Foveavirus ), the members of Betaflexiviridae family and Tymovirales order, are the most important viruses of apple trees among the viruses affecting pome fruits around the world. These viruses are symptomless in most commercial apple varieties. For detection and determination of certain molecular properties of ASPV and ASGV, during a survey in 2011 and 2012, symptomatic and symptomless apple leaves and blossoms were collected from the main apple growing provinces of Iran (Isfahan, Western Azarbaijan and Alborz). The dsRNA was extracted from the leaves and blossoms and used as template in reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) with ASPV and ASGV specific primers. The amplified PCR products of 273 bp and 404 bp with ASGV specific primer pairs (ASGV-F/ASGV-R and ASGV-Pf/ASGV-Pr) and 264 bp and 370 bp with ASPV specific primer pairs (ASP-C/ASP-A and ASPV-F/ASPV-R) confirmed infection of samples with ASGV and ASPV, respectively. ASPV and ASGV were also detected in some samples as mixed infection. The primers were designed for the amplification of full length of ASPV and ASGV coat protein genes based on available sequences at GenBank. The PCR products of 713 bp and 1434 bp with designed ASGV and ASPV specific primers were amplified in some samples. The RT-PCR products were sent for sequencing. The BLAST comparisons showed high homology between nucleotide sequences of Iranian isolates of ASPV and ASGV and those of other ASPV and ASGV isolates available at GenBank. Multiple alignment of 713 bp segment of ASGV coat protein gene with those of other ASPV and ASGV isolates available at GenBank revealed Iranian isolate of ASGV had highest (99.1%) and lowest (98.5%) identity with South Korean (JN792477) and Indian isolates (FJ952160), respectively. Phylogenetic analysis of nucleotide sequence of ASGV coat protein gene revealed closer relationship between ASGV Iranian and Korean isolates (JN792477) than other ASGV isolates available at GenBank. The Nucleotide sequence of 370 bp of ASPV showed highest (86.6%) and lowest (82.8%) identity with Japan (AB045371) and Czech Republic (AJ968944) isolates. To our knowledge, this is the first report of ASGV and ASPV on apple trees in Iran. Key words : Apple stem pitting virus, Apple stem grooving virus, RT-PCR, Alignment, Phylogenetic tree.
سیب درختی ( Malus domestica Borkh) متعلق به خانواده Rosaceae از میوه های مهم و اقتصادی مناطق معتدله و سردسیری ایران است. ویروس ساقه شیاری سیب Apple stem grooving virus (ASGV) عضو تیپ جنس Capillovirus و ویروس ساقه آبله ای سیب Apple stem pitting virus (ASPV) عضو تیپ جنس Foveavirus متعلق به خانواده Betaflexiviridae ، از مهمترین ویروس های بیماری زای سیب محسوب می شوند. آلودگی این دو ویروس درسیب عمدتا بدون علامت است. در این پژوهش به منظور ردیابی و تعیین برخی خصوصیات مولکولی دو ویروس ساقه شیاری و ساقه آبله ای سیب، طی سال های 1390 و 1391 از برگ و شکوفه درختان دارای علایم و فاقد علایم ویروسی از باغات سیب استان های اصفهان، آذربایجان غربی و البرز نمونه برداری انجام شد. از برگ و شکوفه های جمع آوری شده، RNA دو رشته ای استخراج و به عنوان الگو در آزمون RT-PCR استفاده شد. آلودگی نمونه ها به ویروس های ASGV و ASPV در آزمون RT-PCR با تکثیر قطعات bp 273 و bp 404 به ترتیب با استفاده از جفت آغازگر های اختصاصی ASGV-F/ASGV-R ، ASGV-Pf/ASGV-Pr و قطعات bp 264 و bp 370 با استفاده از جفت آغازگر های اختصاصی ASP-C/ASP-R و ASPV-F/ASPV-R تایید شد. از 180 نمونه بررسی شده 128 نمونه آلودگی به ویروس ساقه شیاری سیب و از 175 نمونه بررسی شده 45 نمونه آلودگی به ویروس ساقه آبله ای سیب را نشان دادند که نشان دهنده شیوع بالای این دو ویروس در باغات سیب ایران می باشد. آلودگی همزمان به دو ویروس ASGV و ASPV در تعدادی از نمونه ها مشاهده گردید. به منظور تکثیر توالی کامل ژن پروتیین پوششی هر دو ویروس، طراحی جفت آغازگر های ASGV-F1/ ASGV-R1 وASPV-F1/ ASPV-R1 بر اساس توالی های موجود در بانک ژن انجام شد. قطعات مورد انتظار 713 و bp1434 با استفاده از آغازگرهای طراحی شده در نمونه های آلوده به ASGV و ASPV تکثیر شدند. قطعات تکثیر شده جهت انجام مقایسه های مولکولی تعیین توالی شدند. مقایسه توالی ها با ابزار جستجوی BLAST شباهت بالای آن ها را با توالی های ASGV و ASPV موجود در GenBank نشان داد. همردیف سازی توالی نوکلئوتیدی ژن پروتیین پوششی جدایه ایرانی ASGV (جدایه ای از سمیرم) با جدایه های موجود در بانک ژن نشان دهنده بیشترین همولوژی (1/99%) با جدایه ای از کره جنوبی (JN792477) و کمترین میزان همولوژی ( 5/98%)با جدایه ای از هند (FJ952160) بود. در درخت تبارزایی که با استفاده از توالی نوکلئوتیدی ژن پروتیین پوششی ASGV رسم شد ارتباط بیشتر جدایه ایرانی ویروس ساقه شیاری سیب با جدایه ای از کره جنوبی تایید شد. همردیف سازی توالی قسمتی از ژن پروتیین پوششی (bp370) جدایه ایرانی ASPV (جدایه ای از سمیرم) با جدایه های موجود در بانک ژن نشان دهنده بیشترین همولوژی (6/86%) با جدایه ای از ژاپن (AB045371) و کمترین میزان همولوژی( 8/82%) با جدایه ای از جمهوری چک (AJ968944) بود. بر اساس اطلاعات موجود این اولین گزارش از ویروس های ساقه شیاری و ساقه آبله ای سیب در ایران می باشد. با توجه به گسترش ویروس های ساقه آبله ای و ساقه شیاری سیب در باغات سیب ایران، اتخاذ روش های مناسب مبارزه ضروری به نظر می رسد.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی