Skip to main content
SUPERVISOR
Amir Massah
امیر مساح (استاد راهنما)
 
STUDENT
J G
زهرا عرب شاه

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1389
Alfalfa mosaic virus (AMV) belongs to the genus Alfamovirus , in the family Bromoviridae , occurs worldwide. The virus can naturally infect many herbaceous and some woody plant hosts (150 species in 22 families) such as alfalfa, potato, bean, pepper, pea, soybean, basil and causes severe losses. Alfalfa mosaic virus is transmitted by aphids, pollen, seed and dodder. Since there are no available molecular data for AMV isolates in Iran. During a survey in 2011 and 2012, to detect and determine certain molecular properties of AMV, leaf samples showing viral symptoms were collected from alfalfa, potato, bean, soybean, pepperandbasil crops in IsfahanandCharmahalva bakhtiariprovinces. Total RNA was extracted from leaf samples and subjected to RT-PCR using specific primer pairs of AMV (AlMV-3pr/AlMV-5pr, AMV-F2/AMV-R2). Several samples amplified expected sizes of 901 bp and 669 bp in RT-PCR, respectively. The amplicons of 13 isolates including ADA4 (Daran-alfalfa), AK2 (Karkhane ghand-alfalfa), SMZ (Daran-potato), PSH (Shahrkord-potato), 13LM (Shahrkord-bean), PPF (Daran-pepper), 4 (Dorcheh-pepper), CLD (Dorcheh-clover), LPK (Kelishad-tomato), PKH (Khomeini shahr-pepper), TBN (Daran-cowpea), WD (Dastgerd-chenopodium) and WS (Dastgerd-weed) representing different hosts and regions were cloned and sequenced. The BLAST search revealed high homology between the Iranian isolates and other AMV isolates available at GenBank. Multiple alignment of coat protein amino acid sequence of Iranian isolates and those of AMV isolates available at GenBank revealed homology ranging from 97.7-100% between Iranian isolates. Nine isolates showed 100% homology and Shahrkord bean isolate showed the lowest homology with other isolates.All Iranian isolates showed highest homology ranging from 98.6-99.5% to American soybean isolate with accession number HQ185569 and China alfalfa isolate with accession number HQ316647 whereas they showed lowest homology ranging from 95.2-97.2% to Korean potato isolate with accession number AB126032 and New Zealand alfalfa isolate with accession number U12510. In phylogenetic analysis, Iranian isolates were placed in one cluster, and there is no separation based on hosts or geographical regions. For comparison of biological properties of isolates, potato and alfalfa isolates were mechanically inoculated on test plants including Chenopodium quinoa , Gomphrena globosa , Nicotiana rustica , Nicotiana glutinosa , Cucumis sativus, Vigna unguiculata and Solanum tuberosum . There are no differences in symptoms of test plants between Daran potato and Dastgerd alfalfa isolates. The infection of test plants to AMV was confirmed via RT-PCR. Key word : Alfalfa mosaic virus , RT-PCR, Coat protein gene, Alignment, Phylogenetic tree
ویروس موزائیک یونجه (AMV) Alfalfa mosaic virus از جنس Alfamovirus و خانواده Bromoviridae دارای گسترش جهانی می باشد. این ویروس به طور طبیعی دامنه وسیعی از گیاهان زراعی و علفی را آلوده می کند و قابل انتقال به بیش از 430 گونه از 51 خانواده گیاهی است. ویروس موزائیک یونجه با آلوده کردن محصولاتی چون سیب زمینی، لوبیا، فلفل، شبدر، نخود، سویا، ریحان و دیگر گیاهان زراعی را خسارات شدیدی به آن ها وارد می کند. این ویروس با شته، دانه گرده، بذر، سس و بطور مکانیکی منتقل می شود. با توجه به اهمیت ویروس موزائیک یونجه و نبود اطلاعات در زمینه پراکنش و خصوصیات مولکولی جدایه های این ویروس، انجام تحقیق در این زمینه ضروری به نظر می رسد. به منظور ردیابی و تعیین تنوع مولکولی جدایه های ویروس موزائیک یونجه در سال های 1390 و 1391 از برگ بوته های یونجه، سیب زمینی، لوبیا، سویا، فلفل، شبدر، گوجه فرنگی و ریحان از مزارع استان های اصفهان و چهارمحال و بختیاری نمونه برداری انجام شد. آر.ان.ای کل از نمونه های برگی استخراج و به عنوان الگو در واکنش RT-PCR استفاده شد. نتایج حاصل از آزمون RT-PCRبا استفاده از جفت آغازگرهای اختصاصیAlMV-3pr/AlMV-5pr و AMV-F2/AMV-R2 به ترتیب با تکثیر قطعات مورد انتظار با اندازه های 901 و 669 تایید شد.قطعات تکثیر شده در آزمون RT-PCR همسانه سازی و تعیین توالی شدند. نمونه های توالی یابی شده شامل جدایه یونجه داران، یونجه کارخانه قند، سیب زمینی داران، سیب زمینی شهرکرد، لوبیای شهرکرد، فلفل دلمه ای داران، فلفل دلمه ای درچه، فلفل سبز خمینی شهر، شبدر درچه، علف هرز سلمه تره دستگرد، علف هرز ترشک دستگرد، گوجه فرنگی کلیشاد و لوبیا چشم بلبلی فریدن بودند. مقایسه توالی نوکلئوتیدی جدایه های ایرانی AMVموجود در بانک ژن به کمک ابزار جستجوی BLAST، تشابه بالای آن ها را با ویروس AMVگزارش شده از سایر نقاط جهان نشان داد. مقایسه توالی آمینواسیدی ژن پروتیین پوششی جدایه های AMV ایرانی نشان داد که میزان تشابه بین جدایه ها از 7/97% تا 100% متغییر می باشد. در میان این جدایه ها نه جدایه شباهت 100درصدی را در سطح آمینواسیدی نشان داده و جدایه لوبیای شهرکرد کمترین میزان شباهت را با سایر جدایه ها داشت. جدایه های ایرانی بیشترین شباهت را با جدایه سویا از آمریکا با شماره دسترسی HQ185569و یونجه از چین با شماره دسترسی HQ316647 (6/98% تا 5/99%) و کمترین شباهت را با جدایه سیب زمینی از کره با شماره دسترسی AB126032 و یونجه از نیوزیلند با شماره دسترسی U12510 (9/95% تا 2/97%) نشان دادند. نتایج حاصل از درخت تبارزایی بر اساس مقایسه توالی آمینواسیدی ژن پروتیین پوششی نشان دهنده قرارگرفتن جدایه های ایرانی در یک شاخه می باشد که حاکی از عدم تفکیک آن ها بر اساس منطقه جغرافیایی و میزبان بود.به منظور مقایسه واکنش جدایه های مختلف ویروس موزاییک یونجه مایه زنی مکانیکی دو جدایه یونجه و سیب زمینی از ویروس به گیاهان Solanum tuberosum ، Gomphrena globosa ، Nicotiana rustica ، Nicotiana glutinosa ، Chenopodium album ، Vigna unguiculata و Phasaeolous vulgaris انجام شد.طی این آزمایش مشاهده شد که این دو جدایه مختلف بر روی گیاهان آزمون، علایم تقریبا مشابهی را ایجاد می نمایند.آلودگی گیاهان تلقیح شده توسط آزمون RT-PCR مورد تایید قرار گرفت. کلمات کلیدی: ویروس موزائیک یونجه، RT-PCR، ژن پروتیین پوششی، همردیف سازی، درخت تبارزایی

ارتقاء امنیت وب با وف بومی