Skip to main content
SUPERVISOR
Salar Dorafshan,Yazdan Keivany
سالار درافشان (استاد راهنما) یزدان کیوانی (استاد مشاور)
 
STUDENT
Fariba Fallahbagherie
فریبا فلاح باقری

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده منابع طبیعی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1386

TITLE

Comparison of genetic variation of wild common carp Cyprinus carpio in the Anzali wetland using PCR-RFLP
The Caspian Sea and its basin is one of the natural habitats of wild common carp Cyprinus carpio . Considering the importance of the genetic variation and population structure studies for management and conservation of species, the genetic diversity of wild common carp in the Anzali wetland was investigated, using PCR-RFLP technique. In this study 200 sexually mature individuals of wild common carp, were collected from five stations including, Siah Keshim protected area, Selke wild refuge, Sorkhankol wild refuge, Abkenar region and Anzali wetland estuary (40 individuals from each station). DNA was extracted using ammonium acetate method from fin clips. PCR amplification of the mtDNA D-loop region was performed using a pair of primer and produced a fragment with 420bp length. According to identifying this segment, two specimens from Abkenar and Sea sequenced and submited in Gene Bank by accession number GU225730 and GU320667 respectively. PCR product was digested using forty Endonuclease enzymes. Enzyme digested pattern were observed using 6% polyacrilamid gel and silver staining. Four enzymes; Tas I, Sma I, I, Apo I showed polymorphism. The results showed seven composite haplotypes among five stations. Haplotypes AABA and ABAB were recognized specifically in Abkenar station and haplotypes BAAA and BAAB in Siah keshim and haplotypes A and AAAB only observed in Sorkhankol station. Genetic distances between haplotypes ranged from 0.01334 to 0.35000. Average haplotype and nucleotide diversity were 0.1321 and 0.014196, respectively. Nucleotide divergence among population was measured as 0.0216. statistical Data analysis was performed using ? 2 test with 1000 interactions for detecting geographic heterogeneity. This analysis showed significant differences between different haplotypes among populations except between Abkenar and Siah keshim stations ( p ?0.5). Also, the ? 2 value for Selke and the Caspian Sea estuary, because of their similar haplotypes, was zero. This result showed that there is no difference between Selke and the Anzali wetland estuary stations. It can be concluded that the PCR-RFLP method in mtDNA D-loop region is a suitable marker for population studies of the wild common carp in Anzali wetland and Caspian Sea estuary and this species in the region consists of at least three populations, Abkenar-Siahkeshim, Sorkhankol, and Selke-Sea. Key Word: Wild common carp, Cyprinus carpio , PCR-RFLP, D-loop, Anzali wetland.
دریای خزر و حوضه های آبی مرتبط با آن یکی از زیستگاه های طبیعی کپور معمولی وحشی است. با توجه به اهمیت مطالعه تنوع ژنتیکی و ساختار جمعیت در مدیریت و حفاظت از گونه ها، تنوع ژنتیکی ذخایر وحشی کپور معمولی در تالاب انزلی، با استفاده از روش PCR-RFLP مورد مطالعه قرار گرفت. در این بررسی 200 قطعه ماهی کپور معمولی وحشی Cyprinus carpio بالغ ازپنج ناحیه، هر ناحیه 40 قطعه، شامل مناطق چهارگانه تالاب انزلی (منطقه حفاظت شده سیاه کشیم، پناهگاه حیات وحش سلکه، پناهگاه حیات وحش سرخانکل، منطقه آبکنار) و دهانه تالاب انزلی به دریای خزر صید شدند. استخراج DNA به روش استات آمونیوم از بافت نرم باله دمی انجام گرفت. واکنش PCR با استفاده از یک جفت آغازگر از توالی نوکلئوتیدی ناحیه D-loop مولکول mtDNA انجام گرفت و محصولی به طول 420 جفت باز در تمامی نمونه ها به دست آمد. به منظور شناسایی قطعه، دو نمونه متعلق به منطقه آبکنار و دریا توالی یابی و در بانک ژن جهانی به شماره های دسترسی GU225730 و GU320667 ثبت گردید. جهت هضم آنزیمی محصول PCR از 40 آنزیم اندونوکلئاز استفاده شد. الگوی هضم آنزیمی با استفاده از الکتروفورز ژل پلی اکریل آمید 6% و رنگ آمیزی نیترات نقره مشاهده گردید. 4 آنزیم ( Tas I, Sma I, I, Apo I) الگوی باندی چند شکلی نشان دادند. نتایج این بررسی 7 ترکیب هاپلوتیپی مختلف را بین مناطق نمونه برداری نشان داد که هاپلوتیپ های ABAB و AABA تنها در ایستگاه آبکنار، هاپلوتیپ هایBAAB و AAAدر ایستگاه سیاه کشیم و هاپلوتیپ های A و AAAB فقط در ایستگاه سرخانکل مشاهده شد. فاصله ژنتیکی بین هاپلوتیپ ها از 35/0- 01335/0 متغیر بود. میانگین تنوع هاپلوتیپی و تنوع نوکلئوتیدی به ترتیب 1321/0و 014196/0 بود. درصد اختلاف نوکلئوتیدی در مناطق مختلف نمونه گیری 0216/0 محاسبه شد. جهت تعیین میزان ناهمگنی جغرافیایی در مناطق نمونه برداری، آنالیز آماری داده ها با استفاده از آزمون مربع کای (? 2 ) انجام شد. این آنالیز نشان داد که اختلاف بین هاپلوتیپ ها در تمامی مناطق نمونه برداری به جز ایستگاه آبکنار با سیاه کشیم معنی دار است ( p ?0/05). همچنین در این آنالیز میزان مربع کای بین دو ایستگاه دریا و پناهگاه حیات وحش سلکه به دلیل مشاهده هاپلوتیپ همسان برابر با صفر بود. با توجه به نتایج می توان بیان نمود که روش PCR-RFLP ناحیه D-loop ژنوم میتوکندریایی روش مناسبی به منظور جداسازی جمعیت های کپور معمولی وحشی در تالاب انزلی است و حداقل سه جمعیت مختلف از این گونه در مناطق آبکنار-سیاه کشیم، سرخانکل و سلکه-دریا وجود دارد.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی