Skip to main content
SUPERVISOR
بهرام شریف نبی (استاد راهنما) ناصر صفائی (استاد مشاور) ابوالقاسم اسماعیلی (استاد مشاور)
 
STUDENT
Masoumeh Mostafa
معصومه مصطفی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1386

TITLE

Detection of Genes Involved in Destruxin B Production and the Role of Genes in Alternaria Brassicae Pathogenicity in Rapeseed
Alternaria leaf spot is one the most important fungal disease of Crusiferous palnts, that affect the quality and quantity of these plants every year.This disease is caused by three seedborne pathogenic fungi named A. brassicae , A. brassicicola and A. raphani in most area of the world. Infection caused by Alternaria . is an important in the decrease of the seed germination. A. brassicae is known as disease agent of canola leaf spot in Canada , America , India and most Euroupian countries, and in Iran this species was isolated from canola fields of Golestan, Khozestan and western Azarbayejan. A. brassicae produce some phytotoxins in infected tissue and followed by the colonization of infected tissues, A. brassicae produce some phytotoxins in host tissue. Destruxin B is the major phytotoxin produced by this fungus in vitro and in plant. Synthesis and secreting of this toxin is related to NRPS-ABC traorter gene cluster in the genom of thes fungus.Mor gene analysis of this cluster my show the role of NRPS-ABC traorter gene cluster and phytotoxins synthesis by them in pathogenicity, ecology and physiology. Therfore, this research focused on the study of disease mechanism in six isolates of A. brassicae by molecular, chemical and biological methods to increase our knowledge of disease mechanism. In this research, from 65 isolates of Alternaria . isolated from leaf, pod and stem of canola,was obtained four species A. alternate , A. arborescense , A. infectoria and A. raphani , six isolates of A. brassicae was taken from Tarbiat Modarres of Tehran. A. brassicae isolates confirmed by the use of specific primers. For detection of present or absence of AbrePsy1 and AbreAtr1 genes in the studied isolates, PCR assay was done. The amount of transcription in the mentioned genes correspondenced to pathogenicity NRPS-ABC traorter gene was studied by Real time PCR method. In determining the ability of toxin production, produced toxin was extracted and relatively purified. The role of phytotoxins produced by each isolate was investigated on canola plants in vitro .On the other hand, severity of pathogenicity of each isolate was measured in the greenhouse. For assessment of AbrePsy 1 and AbreAtr 1 expression and the Keywords : canola , A. brassicae , Phytotoxin, NRPS, ABC traorter.
لکه برگی آلترناریایی یکی از مهم ترین بیماری های قارچی گیاهان خانواده چلیپائیان است که همه ساله تولید این گیاهان را از نظر کمی و کیفی تحت تاثیر قرار می دهد. این بیماری در اغلب مناطق دنیا توسط سه گونه بذر زاد از قارچ آلترناریا به نام های Alternaria brassicae ، brassicicola . A و A . raphani ایجاد می شود. آلودگی به وسیله این بیمارگرها عامل مهمی در کاهش جوانه زنی بذر به حساب می آید. گونه A. brassicae به عنوان عامل بیماری لکه برگی آلترناریایی در کانادا، آمریکا، هند و اغلب کشور های اروپایی شناخته شده است. در ایران نیز این گونه از مناطق کلزا کاری استان های گلستان، خوزستان و آذربایجان غربی جداسازی شده است. این قارچ همزمان با عفونی کردن بافت میزبان، تعدادی فیتوتوکسین را در اندام های آلوده تولید می کند. دستروکسین B فیتوتوکسین اصلی تولید شده توسط این قارچ در گیاه و محیط آزمایشگاه است. سنتز و انتشار این توکسین احتمالا با خوشه ژنیNRPS-ABC traorter‌ در ژنوم این قارچ مرتبط می باشد. تجزیه و تحلیل بیشتر ژن های مرتبط با این خوشه ژنی می تواند نقش این ژن ها و فیتوتوکسین های سنتز شده توسط آن ها را در بیماری زایی، اکولوژی و فیزیولوژی این بیمارگر آشکارتر سازد. لذا در این تحقیق سعی شده تا با استفاده از روش های مولکولی، شیمیایی و زیستی، مکانیسم ایجاد بیماری در شش جدایه از قارچ A. brassicae بررسی شود، تا بدین وسیله باعث افزایش دانش موجود در این خصوص گردد. در تحقیق حاضر از 65 جدایه قارچ . Alternaria جدا شده از نمونه های برگ، غلاف و ساقه آلوده کلزا ، چهار گونه A. alternata ، A. arborescense ، A. infectoria و A. raphani شناسایی شد. شش جدایه A. brassicae نیز از گروه بیماری شناسی دانشکده کشاورزی دانشگاه تربیت مدرس تهیه گردید. جدایه های قارچ A. brassicae با استفاده از جفت آغازگر اختصاصی این گونه مورد تأیید نهایی قرار گرفتند. به منظور ردیابی ژن های AbrePsy 1 و AbreAtr 1 در جدایه های مورد مطالعه، حضور یا عدم حضور این دو ژن در واکنش PCR‌ بررسی شد. میزان رونویسی دو ژن مذکور مرتبط با خوشه بیماری زایی NRPS-ABC-traorter نیز با استفاده از تکنیک Real time PCR مورد بررسی قرار گرفت. برای تعیین توانایی تولید فیتوتوکسین در این جدایه ها، عصاره حاصل از این قارچ استخراج و به طور نسبی خالص سازی شد. سمیت فیتوتوکسین های تولید شده توسط هر جدایه، روی گیاهان کلزا رشد یافته در محیط کشت آزموده شد. از طرف دیگر شدت بیماری زایی نیز در مورد هر جدایه از قارچ در شرایط گلخانه سنجیده شد. به منظور ارزیابی بیان ژن های AbreAtr 1 و AbrePsy 1 و تأیید نقش آن ها در بیماری زایی قارچ A. brassicae ، همبستگی بین میزان رونویسی این ژن ها، میزان سمیت فیتوتوکسین ها و شدت بیماری زایی در جدایه ها واژه های کلیدی: کلزا، A. brassicae ، فیتوتوکسین، NRPS، ABC traorter

ارتقاء امنیت وب با وف بومی