Skip to main content
SUPERVISOR
سمیه استادحسینی (استاد مشاور) محمدحسین نصراصفهانی (استاد راهنما) احمد ریاسی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Mehdi Moradi
مهدی مرادی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1391

TITLE

The Effect of Fibroblast Growth Factor (FGF) Signaling on Development of the Preimplantation Ovine Embryos
Fibroblast growth factors (FGF) are a large family of growth factors which are ubiquitous in the body and play varied roles. Hitherto, 23 FGFs has been identified in mammals. FGFs induce cell growth, differentitation, migration and apoptsis. Four types of membranic fibroblast growth factor receptors (FGFR1/2/3/4) transmit the FGFs signals to the cell. Embryonic lineage markers are often synthesized in a specific embryonic lineage and also are engaged in determination of differential status of the lineages. Several studies have described the effects of FGFs on embryo development. However, there are few studies on ovine embryos. Present study concerned the existence of FGFRs in pre-implantation ovine embryos. Moreover, we investigated the effect of FGF2 and PD173074 as a stimulator and inhibitor of FGF signaling, respectively, on ovine embryo development from day 1 to day 8 post-IVF. The parameters followed in the present study were: 1) blastocyst formation rate, 2) blastocyst quality (cell numbers) and 3) expression level of embryonic lineage markers. Therefore, the effect of FGF2 and PD173074 on these parameters was assayed compared to untreated (control) group. Furthermore, the expression level of seven embryonic (or stem cell) lineage markers, including Sox2, Rex1, Oct4 and Nanog as epiblast markers; Gata4, as primitive endoderm marker and IFNT and Cdx2 as trophoblast markers were assessed via Real-time PCR. The results showed that FGFRs transcripts exist in ovine embryos and their highest expression level appear at the morula stage. Supplementation of FGF2 or PD173074 did not change the blastocyst formation rate or quality. However, FGF2 could alter the expression level of three embryonic lineage markers (Gata4, Nanog and Cdx2). Therefore, the FGF signaling may be a regulator of embryonic lineage segregation. Key Words: Fibroblast growth factor, Ovine embryo, Lineage marker
فاکتورهای رشد فیبروبلاستی(FGF) دسته‌ای از فاکتورهای رشد هستند که حضور گسترده‌ای در بدن داشته و نقش‌های متنوعی را ایفا می‌کنند. تاکنون 23 نوع فاکتور رشد فیبروبلاستی در پستانداران یافت شده‌اند. این فاکتورها می‌توانند رشد، تمایز، مهاجرت و یا مرگ برنامه‌ریزی شده سلولی را القا کنند. پیام این فاکتورها از طریق چهار نوع گیرنده غشایی (FGFR) به داخل سلول منتقل می‌شود. نشانگرهای رده‌های سلولی رویانی فاکتورهایی هستند که معمولا تنها در یکی از رده‌های سلولی رویانی تولید می‌شوند و غالبا در تنظیم وضعیت تمایزی آن رده سلولی نقش دارند. تاکنون مطالعاتی در مورد نقش فاکتورهای رشد فیبروبلاستی بر تکوین رویان و جنین چند گونه صورت گرفته است. با این وجود مطالعات بسیار کمی در مورد نقش FGFها در رویان گوسفند انجام شده است. در این مطالعه ابتدا بیان گیرنده‌های فاکتورهای رشد فیبروبلاستی در مراحل مختلف تکوین رویان پیش از لانه‌گزینی گوسفند مورد بررسی قرار گرفت. پس از تایید حضور گیرنده‌ها، FGF2 به محیط کشت رویان‌ها افزوده و میزان تکوین‌ آنها تا روز هشتم در مقایسه با گروه شاهد مشاهده شد. در ادامه زایگوت‌های تولید شده به صورت برون تنی، از روز اول پس از لقاح به صورت تصادفی به سه گروه تقسیم شدند. این گروه‌ها شامل 1) گروه تیمار شده با FGF2 2) گروه تیمار شده با PD173074 (یک مهار کننده سیگنالینگ فاکتورهای رشد فیبروبلاستی) و 3) گروه شاهد فاقد مکمل. مانند آزمایش قبل، میزان تکوین رویان‌های هر سه گروه ثبت شد و در نهایت در روز هفتم بلاستوسیست‌های هر سه گروه به محلول RLT منتقل شده و برای آنالیزهای ژنتیکی در 70- درجه سانتیگراد ذخیره شدند. در آزمایشات ژنتیکی، بیان هفت نشانگر رده‌های سلولی رویانی شامل Oct4، Rex1، Sox2 و Nanog به عنوان نشانگرهای رده سلولی اپی‌بلاستی (رویانی)، Gata4 به عنوان نشانگر رده سلولی اندودرم اولیه (خارج رویانی) و اینترفرون تاو (IFNT) و Cdx2 به عنوان نشانگر رده سلولی تروفکتودرمی (خارج رویانی) با روش Real-Time PCR سنجیده شد. نتایج آزمایشات نشان داد که رونوشت FGFRها در مراحل مختلف تکوین رویان‌های گوسفندی پیش از لانه‌گزینی حضور دارند و بیشترین سطح بیان را در مرحله مرولا نشان می‌دهند. طبق نتایج افزودن FGF2 و یا PD173074 درصد تشکیل و کیفیت بلاستوسیست را تحت تاثیر قرار نمی‌دهد. با این وجود FGF2 توانست میزان بیان Gata4 را به صورت معنی‌داری (05/0 P) افزایش و بیان Nanog را به صورت معنی‌داری (05/0 P) کاهش دهد. همچنین تغییرات Cdx2 در مقایسه بین دو گروه تیماری FGF2 و PD173074 معنی‌دار بود. به طور کلی نتایج این مطالعه نشان داد که FGFRها در رویان گوسفند بیان می‌شوند اما به نظر نمی‌رسد که افزودن FGF2 یا مهار مسیر پیام‌رسانی فاکتورهای فیبروبلاستی درصد تشکیل بلاستوسیست و کیفیت آن را در رویان‌های گوسفندی پیش از لانه‌گزینی تحت تاثیر قرار دهد. در پایان مشخص شد که این مسیر پیام رسانی می‌تواند موجب تغییر سه نشانگر رده‌های سلولی رویانی یعنی Gata4، Cdx2 و Oct4 شود. در نتیجه سیگنالینگ فاکتورهای رشد فیبروبلاستی احتمالا یکی از عوامل تنظیم کننده تمایز رده‌های سلولی رویانی می‌باشند. کلمات کلیدی: فاکتور رشد فیبروبلاستی، رویان گوسفندی، نشانگر رده سلولی رویانی

ارتقاء امنیت وب با وف بومی