Skip to main content
SUPERVISOR
Seyed amirhossein Jalali hajiabadi,Salar Dorafshan
سیدامیرحسین جلالی حاجی آبادی (استاد مشاور) سالار درافشان (استاد راهنما)
 
STUDENT
Shahrzad Salehi
شهرزاد صالحی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده منابع طبیعی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1393

TITLE

Genetic Structure of Cultivated Stocks of Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) using PCR-RFLP Technique
Rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss ) is the best type of cultivating cold water fish in Iran. Different populations of this type is available in proliferation centers that cause reduction in production and increasing losses in this type of fish. The subject studied in this thesis needs caring aboat broodstock in order to maintaining genetic diversity, implementation of cultivating programs and choosing broodstock as native broodstock bank in populations. In this study, genetic diversity of this breed or sampling 204 pieces of broodstock fishes from 8 provinces was studied; It was studied in ChaharMahal Bakhtyari (CH), Kohgiloye Boyer ahmad (Y), Fars (F), Lorestan (L), Mazandaran (M), Tehran (T), Ghazvin (Q) and Azarbayejan – Gharbi (AGH) by means of PCR – RFLP method. DNA was extracted by using Aluminum Acetate from Caudal fin. PCR reaction was done by using a pair of primer nucleotide production in ND5/6 part of mtDNA moleculs. In order to enzyme digestion for PCR product, 10 endonuclease were used. Enzyme digest patterns were observed using 6 polyacrilamid gel and silver staining. 5 enzymes ( Hinf I , Taq I , Rsa I , Bshf I , Ava II) showed polymorphism. The results showed 32 composite haplotypes. Among these samples, in Y fish farm the number os 13 haplotype as the maximum haplotype number and after that in L fish farm 9 haplotype number was found. The average of Rainbow trout cultivating haplotupe diversity and nucleotide gene in defferent zones respectively was 0.8152 ± 0.032 , 0.007736 ± 0.00434. The most haplotype and nucleotide diversity was registered in L and then Y fish farms. The least haplotype and nucleotide diversity respectively was found in M and CH farms. The most nucleotide difference was among L and M farms by 0.02234 and the least difference was between T and F farms by 0.00215. Also it was illustrated that the most portion of Heterogenous Rainbow troutis among farms belonging to AGH, L and Y farms. Based on Fst, most of the difference observed between populations is 0.7684 was obtained between AGH and Q and opulations and the least differences was obtained 0.0286 between T and CH. According to tree diagram graphs, AGH and Y was placed in separate branch.. Due to the results, we can claim that AGH, Y and L farms samples areindependent populations of Rainbow trout and also can be considered in cultivating programs. Keywords: Oncorhynchus mykiss , PCR-RFLP، ND5/6, Genetic diversity, Haplotype compositions, nucleotide diversity
قزل‌آلای رنگین‌کمان ( Oncorhynchus mykiss ) مهمترین گونه پرورشی سردابی در ایران است. جمعیت‌های مختلفی از این گونه در مراکز تکثیر وجود دارد که بعضاً خویش‌آمیزی بالا، کاهش تولید و افزایش تلفات در آنها مشاهده شده است. این موضوع ضرورت مطالعه در مورد ماهیان مولد مراکز تکثیر را می‌طلبد تا به منظور حفظ تنوع ژنتیکی جمعیت‌ها و اجرای برنامه‌های اصلاح‌نژادی و انتخاب مولدین به عنوان بانک مولدین بومی در جمعیت‌ها اقدام شود. در این مطالعه تنوع ژنتیکی این گونه با نمونه برداری از 160 قطعه ماهی مولد از 8 استان چهارمحال و بختیاری، کهگیلویه و بویر احمد، فارس، لرستان، تهران، قزوین، مازندران و آذربایجان غربی با استفاده از روش PCR-RFLP مورد مطالعه قرار گرفت. استخراج DNA به روش استات آمونیوم از باله دمی انجام گرفت و واکنش PCR با استفاده از یک جفت آغازگر از توالی نوکلئوتیدی ناحیه ND5/6 مولکول mtDNA انجام گرفت. جهت هضم آنزیمی محصول PCR از 10 آنزیم اندونوکلئاز استفاده شد. الگوی هضم آنزیمی با استفاده از الکتروفورز ژل پلی اکریل آمید 8 درصد و رنگ آمیزی نیترات نقره مشاهده گردید. 5 آنزیم ( Hinf I, Taq I, Rsa I, Bshf I, Ava II) الگوی باندی چند شکلی نشان دادند. نتایج این بررسی 32 ترکیب هاپلوتایپی مختلف را بین مناطق نمونه برداری نشان داد. در بین جمعیت ها، جمعیت کهگیلویه و بویر احمد با تعداد 13 هاپلوتایپ و بعد از آن جمعیت لرستان با 9 عدد هاپلوتایپ، بیشترین تعداد هاپلوتایپ را نشان دادند. میانگین تنوع هاپلوتایپی و نوکلئوتیدی ناحیه ND5/6 قزل آلای رنگین کمان پرورشی در مناطق مختلف به ترتیب 032/0 ± 8152/0 و 00434/0 ± 007736/0 بود. بیشترین مقدار تنوع هاپلوتایپی و نوکلئوتیدی را نمونه های جمعیت لرستان و بعد از آن جمعیت کهگیلویه و بویر احمد نشان داد. کمترین میزان تنوع هاپلوتایپی و نوکلئوتیدی به ترتیب مربوط به مازندران و چهارمحال و بختیاری بود. بیشترین اختلاف نوکلئوتیدی بین جمعیت های لرستان و مازندران با مقدار 02234/0 و کمترین اختلاف بین نمونه های تهران و فارس معادل 00215/0 بود. بالاترین سهم هتروژنی قزل آلای رنگین کمان بین جمعیت های پرورشی متعلق به جمعیت های آذربایجان غربی، لرستان و کهگیلویه و بویر احمد بود. براساس میزان Fst، بیشترین میزان تمایز مشاهده شده بین جمعیت ها 7684/0 بین دو جمعیت آذربایجان غربی و قزوین و کمترین تمایز مشاهده شده بین جمعیت ها 0286/0 بین جمعیت تهران و چهارمحال و بختیاری بود. ترسیم دندروگرام شجره ای بین جمعیت ها، جمعیت آذربایجان غربی و بعد از آن جمعیت کهگیلویه و بویر احمد را به طور مجزا از سایر جمعیت ها نشان داد. با توجه به نتایج می توان بیان نمود که نمونه های جمعیت آذربایجان غربی و کهگیلویه و بویر احمد و لرستان جمعیت های مستقلی از قزل آلای رنگین کمان هستند و می توانند در برنامه های اصلاح نژاد این مسئله مد نظر قرار گرفته شود. کلمات کلیدی: ND5/6، تنوع هاپلوتایپی، تنوع نوکلئوتیدی ، ساختار ژنتیکی

ارتقاء امنیت وب با وف بومی