Skip to main content
SUPERVISOR
Masoud Bahar,Ali Ahoonmanesh,Jahangir Khajehali
مسعود بهار (استاد راهنما) علی اهون منش (استاد راهنما) جهانگیر خواجه علی (استاد مشاور)
 
STUDENT
Parham Hosseini
پرهام حسینی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1384
Phytoplasmas are known as plant-pathogenic agents that cause great losses in economical plants. Phytoplasma diseases in potato, including potato whitches' broom and potato purple top, are documented worldwide, but there is no information confirming the importance of these diseases in Iran . In 2006-2007, symptoms typical of phytoplasma induced diseases were observed in sprouted seed tubers and potato plants in fields surveyed over an areas of Isfahan, Tehran, Kermanshah, Hamedan, Chaharmahal-O-Bakhtiari and East Azarbaijan provinces. The diseases are characterized by stunting, slight purple top, discoloration of new growth, leaf curl, swollen nodes, broken auxiliary buds and formation of aerial tubers similar to potato purple top disease symptoms. The potato sprouts emerged from generated tubers of these plants were spidle or hairy. Planting these symptomatic tubers in green house, promoted to produce potato purple top symptoms in generated plants, except one of them which showed witches,-broom symptoms with general stunting, yellowing and proliferation of auxiliary shoots. To detect phytoplasmas associated with infected plants, extracted DNA from sprouts of collected tubers or midrib of foliages was used as the template for nested PCR assay primed by phytoplasma universal primers P1/P7 and P1/Tint in the first round amplification followed by R16F2n/R16R2 and fU5/rU3 for nested reaction. Except for few DNA samples, no DNA amplification was observed when the P1/P7 and P1/Tint primers were used in first round PCR. However when direct PCR products were employed in nested PCR using R16F2n/R16R2 and fU5/rU3 primer pairs, fragments sized approximately 1239bp and 879bp DNA fragment were amplified respectively. Characteristic banding patterns obtained from restriction analysis of PCR products using Alu I, Eco RI, Cfo I, Kpn I, Hin dIII, Mse I, Rsa I and Taq I endonucleases from positive samples confirmed significant genetic differences among fragments of samples amplified in nested-PCR assay, indicating that divergent strains of phytoplasma might be involved in promoting whiches' broom and purple top symptoms in potato growing areas of Iran . The representatives of strains with different PCR-RFLP patterns were subjected to DNA sequencing. Nucleotide sequence comparison and alignment of a DNA-base segment of 16S rRNA gene sequences revealed that contained nucleotide sequences from representative isolates have high-level similarity (98-99%) to 16S rRNA phytoplasma sequences that were previously reported. Sequences analysis of 16S rRNA gen
فایتوپلاسماها یکی از عوامل مهم بیماری‌های گیاهان بوده و سالانه خسارات فراوانی به محصولات کشاورزی در سراسر جهان وارد می‌کنند. در سال‌های اخیر، علایم مشابه با بیماری‌های فایتوپلاسمایی در جوانه غده‌های بذری و بوته‌های سیب‌زمینی‌ مناطقی از استان‌های اصفهان، تهران، کرمانشاه، همدان، آذربایجان‌شرقی و چهارمحال و بختیاری مشاهده شد. بوته‌های سیب‌زمینی آلوده علائم ریزبرگی، پیچیدگی برگ، زردی و ارغوانی شدن حاشیه برگچه‌ها، تشکیل غده‌های هوایی و پلاسیدگی غده‌‌ها را دارا بودند که با علائم بیماری فایتوپلاسمای سر ارغوانی سیب‌زمینی شباهت داشت. علایم بیماری در غده‌ها شامل ایجاد جوانه‌هایی نازک و مویی‌شکل و تولید غده‌های ثانویه به جای جوانه بودند غده‌ها پس از کشت گلخانه‌ای، علائم بیماری سر ارغوانی را نشان دادند و در یک نمونه علائم بیماری جاروی جادوگر شامل پرپشت شدن بوته و تغییر شکل برگ‌ها مشاهده شد. برای تشخیص فایتوپلاسمایی بودن در این نمونه‌ها، ابتدا از جوانه غده‌ها و رگبرگ بوته‌های آلوده استخراج DNA صورت گرفت و سپس از واکنش‌های زنجیره‌ای PCR و Nested-PCR برای تکثیر فایتوپلاسمایی استفاده شد. در ردیابی فایتوپلاسما در این نمونه‌ها طی PCR دور اول توسط جفت آغازگرهای P1/P7 و P1/Tint، در دو نمونه قطعه 1784 نوکلئوتیدی تکثیر شد و بقیه نمونه‌ها باندی تولید نکردند، ولی استفاده از جفت آغازگرR16F2n/R2 در Nested-PCR بعد از PCR اول با جفت آغازگرهای P1/P7 و P1/Tint منجر به تکثیر یک قطعهbp 1239 در تعداد زیادی از این نمونه‌ها شد. همچنین جفت آغازگر fU5/rU3 نیز یک قطعه bp876 از DNA حاصل از PCR دور اول با P1/P7 و P1/Tint تکثیر نمود. ردیابی توالی فایتوپلاسمایی از سیب‌زمینی‌های دارای علایم بیماری‌های جاروی‌جادوگر و سر ارغوانی سیب‌زمینی و عدم تکثیر قطعات DNA فایتوپلاسمایی در گیاه سالم نشان داد که عوامل فایتوپلاسمایی در ایجاد این بیماری‌ها در مزارع سیب‌زمینی مورد بررسی نقش دارند. برای شناسایی جدایه‌های بیمارگر سیب‌زمینی جمع‌آوری شده، از آزمون PCR-RFLP استفاده شد. به این منظور یک قطعه bp1239 نوکلئوتیدی از ناحیه داخلی ژن 16Sr RNA فایتوپلاسمایی به کمک جفت‌آغازگر P1/P7 در PCR دور اول و R16F2n/R16R2 در دور دوم تکثیر شد و سپس این قطعه توسط آنزیم‌های محدودگر Alu I، Eco RI، Cfo I، Hin dIII، Kpn I، Mse I، Rsa I و Taq I برش داده شدند. نتایج PCR-RFLP نشان داد که جدایه‌های مختلفی در ایجاد بیماری فایتوپلاسمایی سر ارغوانی سیب‌زمینی نقش دارند. بر اساس این آزمون, چهار الگوی باندی مختلف از فایتوپلاسماهای سیب‌زمینی به دست آمد که تعدادی از آنها به عنوان نماینده برای تعیین توالی نوکلئوتیدی انتخاب گردیدند. مقایسه توالی‌های نوکلئوتیدی این جدایه‌ها با توالی‌های موجود در بانک ژن نشان داد که توالی جدایه‌های مورد مطالعه به میزان 98-99% با توالی فایتوپلاسماهای ثبت شده در بانک ژن جهانی(NCBI) مشابهت دارند. بررسی توالی‌های به دست آمده مشخص نمود که علائم جاروی‌جادوگر سیب‌زمینی در گلخانه توسط گونه Candidatus Phytoplasma trifolii ایجاد گردیده است و گونه‌های Ca. Phytoplasma trifolii، Ca. Phytoplasma astrisو Ca. Phytoplasma solani عوامل فایتوپلاسمایی بروز بیماری سر ارغوانی سیب‌زمینی در مزارع ایران می‌باشند. دو گونه Ca. Phytoplasma کاهش آلودگی موثر است.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی