Skip to main content
SUPERVISOR
Badraldinebrahim Seyed tabatabaei,Cyrus Ghobadi
بدرالدین ابراهیم سیدطباطبایی (استاد راهنما) سیروس قبادی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Golnoush Madani
گلنوش مدنی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1384

TITLE

Regeneration, Transformation and Assessment of Genetic Relationships By ISSR Marker Among Cultivars of Cultivated Octaploid Strawberries
Strawberry is an important horticultural product that is favorite because of its highly desirable taste, flavor, mineral elements, vitamins and other secondary metabolites. Iran is the 14 th country in culture area and 18 th in amount of annual strawberry production in the world; but in plant yield level ranks 38 th worldwide. To develop effective strawberry breeding systems, we need to have a definitive identification and selection of cultivars, suitable propagation method and improved crop to tolerate biotic and abiotic stresses via genetic engineering. So, in this investigation 19 ISSR primers were selected for determination of genetic diversity of 22 strawberry cultivars cultured in Iran . These primers created polymorphic bands (78.8% of total 377 scored DNA fragments) and after analysis of genetic similarity between cultivars (UPGMA percent method), three cultivars (Selva, Camarosa and Missionary) were chosen. Next, regeneration of these cultivars which could be very useful for mass propagation and genetic transformation (transient and stable) were studied. At first, plant regeneration was optimized in different media for leaf disk, shoot tip meristem and seedling hypocotyl explants. The best response toward shoot induction was obtained from explant tissues of shoot tips when placed in MS media supplemented with two mg/lit of BAP and IAA. Shoots were regenerated at high frequencies from hypocotyls explants grown on MS medium containing 2,4-D, BAP and TDZ (0.01, 0.1 and 1 mg/lit respectively) too. These explants regenerated and proliferated directly. After this stage, transient expression of p5cs gene (effective to increase strawberry drought tolerance) via vacuum agroinfiltration method in strawberry leaves and stable transformation with agrobacterium -mediated method was studied. Strain of Agrobacteruim tumefaciens was LBA4404 which contained PBI121- p5cs plasmid with nptII and gus genes as markers. Results of this study showed that it is possible to express foreign p5cs gene, increasing the amount of free proline in strawberry to tolerate some environmental stresses.
توت فرنگی ( Fragaria × ananassa L.) یکی از محصولات مهم باغبانی است که به دلیل مقادیر قابل ملاحظه مواد معدنی، انواع ویتامین ها، عطر و طعم دلپذیر میوه و ظاهر زیبا مقبولیت بالایی در بین مصرف کنندگان دارد. ایران از لحاظ سطح زیر کشت این محصول رتبه چهاردهم و از لحاظ تولید سالانه جایگاه هجدهم را در دنیا به خود اختصاص داده است، اما از نظر بازده محصول در واحد سطح سی و هشتمین کشور دنیا محسوب می گردد. نظر به اینکه بهبود کمیت و کیفیت باغبانی محصول این گیاه از اهداف کلیدی برنامه اصلاح توت فرنگی می باشد، لذا انتخاب ارقام مناسب کشت، روش های تکثیر کارا و همچنین دست ورزی ژنتیکی به منظور افزایش مقاومت به تنش های زیستی و غیر زیستی همواره مورد مطالعه قرار گرفته است. در راستای استمرار و تحقق این اهداف و به منظور انتخاب ارقام مناسب برای ورود به برنامه های اصلاح توت فرنگی به کمک 19 آغازگر ISSR با موتیف های دو و سه نوکلئوتیدی، تنوع ژنتیکی 22 رقم توت ‌فرنگی اکتاپلوئید مورد مطالعه قرار گرفت. تجزیه و تحلیل داده های حاصل از ISSR نشان داد که از مجموع 377 باند تولید شده، 8/78 درصد باندها چند شکل بودند و بر اساس محاسبه تشابه ژنتیکی بین ارقام توسط ضریب تشابه جاکارد و به روش UPGMA، سه رقم سلوا، کاماروسا و میسیونری انتخاب شدند؛ بررسی باززایی این گیاهان به منظور کاربرد اقتصادی در تولید انبوه و امکان انتقال موقت و دائم ژن p5cs جهت افزایش تحمل به تنش خشکی انجام گرفت. ابتدا بهینه سازی باززایی گیاه از ریزنمونه های برگ، مریستم نوک شاخساره به همراه ساختارهای اولیه برگ و هیپوکوتیل گیاهچه در محیط های کشت مختلف صورت گرفت. از بین ریزنمونه ها، مریستم توت فرنگی در محیط کشت MS تغییر یافته حاوی دو میلی‌گرم در لیتر BAP و IAA و هیپوکوتیل گیاهچه در محیط کشت MS حاوی تنظیم کننده‌های رشد 2,4-D، BAP و TDZ به ترتیب به میزان 01/0 ، 1/0 و 1 میلی‌گرم در لیتر باززا گردیدند. در هر دو ریزنمونه پرآوری (Proliferation) به صورت مستقیم، بدون تشکیل فاز حد واسط کالوس و با بالاترین میزان باززایی صورت گرفت. در مرحله بعد، بیان موقت ژن p5cs به روش Vacuum Agroinfiltration در برگ و بیان پایای ژن با واسطه گری اگروباکتریوم سویه LBA4404 حاوی پلاسمید pBI121- p5cs و ژن های مارکر gus و nptII در ریزنمونه های مریستم و هیپوکوتیل گیاهچه بررسی شد. نتایج نشان داد که بیان ژن p5cs خارجی در گیاه توت فرنگی امکان پذیر است و میزان پرولین آزاد را به عنوان محصول نهایی ژن می افزاید.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی