Skip to main content
SUPERVISOR
Cyrus Ghobadi,Badraldinebrahim Seyed tabatabaei,Bahram Sharifnabi
سیروس قبادی (استاد مشاور) بدرالدین ابراهیم سیدطباطبایی (استاد مشاور) بهرام شریف نبی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Javad Mirzabeigi
جواد میرزابیگی ازغندی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1386

TITLE

Transition and Expression of Albugo Candida Pathogenicity Candidate Molecules in Some Model Plant
The fungal like organism, Albugo candida (pers) Roussel from family Albuginaceae, order Albuginales, Saskatoon university. After transformation by agroinfilteration in Arabidopsis and tobacco non of the samples caused morphologic signs in these plant. In canola both of the constructs showed the disease signs chlorosis. Then eight construct were sequenced. Two sequences which showed the disease signs, were compared with other pathogenic proteins containing Nep1 domain by Blastx and Blastp which pointed the adaptation. By signalp software, the existences of marker peptide were verified in these two sequences that causes the secretory property in protein. Therefore, the sequences which were adapted with two pathogenic sequences by doing Blast, were choose for phylogenetic relationship comparison by MEGA4 software, then the phylogenetic tree were constructed. From two sequences regarding A. candida, one is located in some group with Sclerotinia sclerotiorum and another one is located in very close branch to this group. These result showed harmony with the blast results in which these two fungi had most similarity with fungal like A. candida. Then the canola leaf samples were used for 2d-electrophresis and the staining results showed very little amount in protein extraction, so that it was impossible to observe the differences between the treatment samples and control samples. According to what was observed, it can be concluded that was maybe in the stage of protein extraction, the protocol was not efficient and there is a need to optimize it for canola plant. Key words : Transient expression , Pathogen effectors molecules , Agroinfilteration , Albugo candida
شبه قارچ Albugo candida (pers) Roussel از خانواده Albuginaceae ، راسته Albuginales و رده Peronospromycetes از Oomyceta و عامل بیماری زنگ سفید کلزا می باشد. این شاخه از قارچ ها برای ایجاد بیماری در گیاه میزبان دو نوع فاکتور بیماری زایی تولید می کنند؛ گروهی در فضای بین سلولی و گروهی به صورت داخل سلولی عمل می کنند. برای مطالعه فاکتورهای بیماری زا لازم می باشد که ژن هایی که این پروتئین ها را کد می کنند، در درون گیاه بیان گردند. به علت فقدان اطلاعات در زمینه فاکتورهای بیماری زا و ژن های موثر در بیماری در این شبه قارچ، انجام تحقیقی در این مورد، مفید به نظر می رسد. در این تحقیق تعداد 50 دستواره حاوی ژن های کاندید به تولید مولکول های موثر شبه قارچ A.candida که از کتابخانه cDNA این شبه قارچ توسط دکتر برهان از دانشگاه ساسکاتون جداسازی شده بودند، برای انجام انتقال و بیان موقت بر روی گیاه آرابیدوپسیس مورد استفاده قرار گرفتند. پس از انجام انتقال موقت در گیاه آرابیدوپسیس با استفاده از اگرواینفیلتراسیون هیچکدام از نمونه ها علائم مورفولوژی در گیاه تولید نکرد، از این جهت دستواره ها به دو گیاه کلزا و توتون نیز انتقال داده شد که در گیاه کلزا دو دستواره علائم بیماری شامل زردی برگ را بروز داد و در گیاه توتون نشانه ای دیده نشد. سپس تعداد هشت دستواره برای توالی یابی فرستاده شد. دو توالی که علائم بیماری زایی را نشان داده بودند بعد از انجام آنالیزهای Blastx,p وtBlastn با دیگر پروتئین های بیماری زا که دارای دومین NEP1 بودند همخوان شدند. با استفاده از نرم افزار SignalP وجود پپتید نشانه در این دو توالی تایید شد که به پروتئین خاصیت ترشحی بودن را می دهد. سپس توالی هایی که پس از انجام Blast با دو توالی بیماری زا همخوان شده بودند برای مقایسه روابط فیلوژنتیکی با استفاده از نرم افزار MEGA4 انتخاب شدند، که در درخت فیلوژنتیکی رسم شده توالی های مربوط به قارچ A.candida در دو دسته متفاوت به این صورت که یکی از آن ها با قارچ Sclerotinia sclerotiorum و دیگری با قارچ Neosartorya fischeri هم گروه شدند به مانند همخوان سازی حاصل از Blast که در آن ها نیز این دو قارچ بیشترین شباهت را با توالی های شبه قارچ A.candida داشتند. پس از این، نمونه برگ هایی از گیاه کلزا تهیه شد و برای انجام الکتروفورز دو بعدی استفاده گردید که بعد از رنگ آمیزی مشخص شد که پروتئین بسیار کمی استخراج شده است که مشاهده تفاوت بین نمونه تیمار و نمونه شاهد امکان پذیر نبود. بر اساس آنچه که مشاهده گردید می توان به این نتیجه رسید که احتمالاً در مرحله استخراج پروتئین پروتکل کارآمد نبوده و نیاز به بهینه سازی پروتکل برای گیاه کلزا ضروری است. واژه های کلیدی : مولکول های موثر بیمارگر، اگرواینفیلتراسیون، A.candida

ارتقاء امنیت وب با وف بومی