Skip to main content
SUPERVISOR
Ardeshir Ariana,Masoud Bahar,Majid Talebi,Bahram Sharifnabi
اردشیر آریانا (استاد مشاور) مسعود بهار (استاد راهنما) مجید طالبی (استاد مشاور) بهرام شریف نبی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Eliza Karimi
الیزا کریمی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1389

TITLE

Comparative Molecular Analysis of Candidatus Phytoplasma aurantifolia Isolates in Central Part of Iran
Lime witches’ broom is an important phytoplasma disease which is first reported from neighboring countries in Persian Gulf and subsequently distributed extensively in Iran. Detection of causal agent of lime witches’ broom ( Candiadatus Phytoplasma aurantifolia) from fruit trees, field crops, vegetables, ornamentals and weeds in Isfahan province during recent years, indicates that Ca. Phytoplasma aurantifolia is spread from host to host in central part of Iran. Despite considerable prevalence of Ca . Phytoplasma aurantifolia, there is no sufficient information regarding the correlation between its genetic diversity, host range and geographics distribution. Samples of plants showing phytoplasma symptoms including lime, alfalfa, clover, apple, peach, potato and tomato were collected from the region during summer and fall 2012. Phytoplasmas were detected in symptomatic plants by nested PCR using P1/P7 or P1A/P7A followed by R16F2n/R16R2. To 0in 0in 0pt" Key words : Phytoplasma ,Ca . Phytoplasma aurantifolia، PCR-RFLP، Peanut Witches , –Broom.
بیماری فایتوپلاسمایی جاروک لیموترش به عنوان یکی از بیماری‌های مهمی که از کشورهای حاشیه خلیج فارس گزارش شده، در ایران نیزگسترش زیادی یافته است. ردیابی عامل بیماری جاروک لیمو ترش aurantifolia) ( Candidatus Phytoplasma در درختان میوه، گیاهان زراعی، سبزی، زینتی و علف‌های هرز استان اصفهان در سالهای اخیر نشان دهنده دامنه میزبانی و انتشار قابل توجه این عامل بیماری در منطقه می باشد. با وجود انتشار قابل توجه این فایتوپاسما در ایران، هنوز معلوم نیست جدایه‌های مختلف Ca . Phytoplasma aurantifoli a از میزبان‌های متنوع و شرایط جغرافیایی متفاوت چه تفاوت‌ها و شباهت‌هایی باهم دارند و این شباهت‌ها و اختلافات ژنتیکی تا چه حد در گسترش میزبانی و جغرافیایی این فایتوپلاسما تاثیر دارد. برای درک بهتر از تنوع Ca . Phytoplasma aurantifolia، تعداد قابل توجهی از نمونه‌های گیاهی دارای علایم فایتوپلاسمایی از میزبان‌های مختلف این فایتوپلاسما شامل لیموترش، یونجه، سیب، بادام، هلو، شبدر، سیب زمینی و گوجه فرنگی در بازه زمانی اواخر شهریورماه تا اوایل آبان ماه1390، جمع آوری شد. پس از استخراجDNA ، از واکنش Nested-PCR با استفاده از جفت آغازگرP1/P7 و P1A/P7A در دور اول و جفت آغازگر R16F2n/R16R2 در دور دوم، برای ردیابی فایتوپلاسما در این نمونه‌ها استفاده گردید. به منظور تمایز گروه‌های فایتوپلاسمایی همراه با این نمونه‌ها، از تکنیک PCR-RFLP استفاده شد. بدین منظور مقایسه الگوی برش آنزیمی قطعات تکثیر شده با واکنش Nested-PCRو بکارگیری آنزیم‌های TaqI ، HinfI و HapII انجام گرفت. نتایج حاصل از PCR-RFLP نشان داد که به غیر از فایتوپلاسماهای گروه Aster yellow s ، فایتوپلاسماهای گروه Peanut Witches , –Broom در ایجاد بیماری‌های فایتوپلاسمایی نمونه‌های مورد بررسی ، نقش مهمی دارند. نتایج حاصل از توالی‌یابی DNA فایتوپلاسمایی و بررسی درخت فیلوژنتیکی جدایه‌های مربوط به گروه Peanut Witches , –Broom نشان داد که جدایه‌های مورد نظر در دو گروه اصلی، از یکدیگر مجزا می‌شوند که جدایه‌های MM1، RS3، AH1، AN1، App1 وApp8 (زیرگروه IA) بعنوان Ca. Phytoplasma aurantifolia طبقه بندی شدند. اعضای زیر گروه B با جدایه‌های یونجه (AF2) و بادام ایرانی (PA14) هم گروه بودند که همه آنها شباهت زیادی به جدایه‌های Cactus Witches , –Broom ، Faba bean phyllodyو phytoplasma Witches , –Broom Soybean داشتند که قبلا به عنوان زیر گروه C، گروه Peanut Witches , –Broom طبقه بندی شده‌اند. در این تحقیق، جدایه‌های یونجه E2 (اردستان) و E3 (کرمان) به طور مشخصی از نمونه‌های دیگر جدا شدند و در گروه مجزای II، قرار گرفتند، هرچند تعیین زیرگروه‌ آنها ممکن نشد. از بررسی توالی‌های بدست آمده جدایه‌های لیموترش، بادام، سیب، هلو و یونجه در این تحقیق، تنوع قابل قبولی بین جدایه‌های گروه Peanut Witches , –Broom مورد بررسی وجود داشت که این تنوع ارتباط معنی داری با نوع میزبان و منطقه جغرافیایی نداشت. این نتایج نشان داد که اگرچه روش PCR-RFLP، برای گروه‌بندی فایتوپلاسماها توصیه شده است، ولی برای تشخیص دقیق عوامل فایتوپلاسمایی قابل اعتماد نیست. لذا برای تعیین گروه‌های فایتوپلاسمایی ضروری است که توالی ژن‌های حفاظت شده آنها با توالی فایتوپلاسماهای شناخته شده مقایسه گردد و استفاده انحصاری از آزمون PCR-RFLP توصیه نمی‌شود. با نتایج پژوهش حاضر، حضور Ca . Phytoplasma aurantifolia و زیر گروه C گروه Peanut Witches,–Broom در نمونه‌های ایران محرز گردید، اما تعیین زیرگروه برای تعدادی از جدایه‌ها با روش گروه‌بندی متداول، ممکن نشد و احتیاج به بررسی‌های بیشتر دارد. به‌کارگیری روش‌های دقیق گروه بندی مانند طراحی جفت آغازگرهای اختصاصی از توالی ژن‌های ریبوزبومی کمتر حفاظت شده جهت تعیین زیر گروه جدایه‌های مورد اختلاف گروه Peanut Witches , –Broom، مورد توجه قرار خواهد گرفت. واژه‌های کلیدی : فایتوپلاسما، Ca . Phytoplasma aurantifolia، PCR-RFLP، Peanut Witches , –Broom

ارتقاء امنیت وب با وف بومی