Skip to main content
SUPERVISOR
Seyed reze Zareie abarghoei,Bahram Sharifnabi
سیدرضا زارعی ابرقویی (استاد راهنما) بهرام شریف نبی (استاد راهنما)
 
STUDENT
Nayereh Navabi
نیره نوابی

FACULTY - DEPARTMENT

دانشکده کشاورزی
DEGREE
Master of Science (MSc)
YEAR
1383

TITLE

Isolation, Over-Expression & Analysis of Physiological Activity of B-1,3- Glucanase From Medicago truncatula
Pathogenesis Related proteins are compounds is produced in response to pathogens or Environmental stress. These proteins can be classified into seven teen group by amino acid sequences, serological differences and Enzymatic kinetic among these classes 1,3-?-Glucanase and Chitinase are most studied be cause of 1,3-?-Glucanase by hydrolyzing1,3-?-Glucan bond and Chitinase by hydrolyzing 1,4-N acetyl amin bond can directly hydrolize fungal cell wall and inhibit fungal growth. The aim of this research was Isolation, over-expression analysis of physiological activity of ?-1,3- glucanase from Medicago truncatula. Until now numerous kind of 1,3-?-Glucanase are Identified in various plants and thein fungicide effect were tested. Watson et al reported 304 protein with peptide mass finger printing technique in medicago truncatula among them a 1,3-?-Glucanase was registered with BF 650622 Id number. But until now It,s Biological activity had ot been studied. In this case by Medicago sativa and Pisum sativum 1,3-?-Glucanase Gene alignment on Medicago truncatula Genome three open reading frame with 50% similarity by having start and stop codon was identified and isolated. Then these fragments was cloned in PET21c vector and expressed in E.coli BL21. SDS PAGE technique reveal that proteins were produce as an Inclusion bodies. We also test their fungicide effect after folding them to achieve their natural structure on Alternaria alternaria and Fusarium graminearum. The result were significant ( P 0.05 ) by SAS system analysi
پروتئین های مرتبط با بیماریزایی (Pathogenesis-related protein ) ترکیبات پروتئینی هستند که توسط گیاه میزبان در پاسخ به حمله عوامل بیماریزا یا تنشهای محیطی تولید می شوند این پروتئینها بر اساس توالی آمینواسیدی، تفاوت های سرولوژیکی و تفاوت در فعالیت آنزیمی به 17 خانواده طبقه بندی شده اند. از میان پروتئین های مرتبط با بیماریزایی، بتا1 و 3- گلوکاناز وکیتینازها بیشتر مطالعه شده اند علت این امر این است که بتا1و3-گلوکانازها با شکستن باندهای بتا 1و3-گلوکان و کیتینازها با شکستن باندهای 1و4-N- استیل گلوکزآمین به طور مستقیم دیواره سلولی قارچها را هیدرولیز و از رشد قارچ جلوگیری می کنند. هدف از این تحقیق، بیان فراوان و بررسی فعالیت فیزیولوژیک پروتئینهای بتا1و3-گلوکاناز در یونجه یکساله می باشد تاکنون بتا1و3-گلوکانازهای زیادی در گیاهان مختلف شناسایی شده وخاصیت ضد قارچ آنها آزمایش شده است. در مطالعه ای که واتسون و همکاران روی یونجه یکساله انجام دادند سیصد و چهار پروتئین با تکنیک انگشت نگاری جرمی پپتید (peptide mass finger printing) شناسایی شد. در بین این پروتئین ها یک بتا 1و3 -گلوکاناز با شماره BF650622 ثبت شد ولی تاکنون فعالیت بیولوژیکی آن بررسی نشده است. در این تحقیق با همردیف سازی ژن های بتا 1و3-گلوکاناز یونجه چند ساله و نخود روی ژنوم یونجه یکساله سه چارچوب خواندن با شباهت بالای 50% و دارا بودن رمز شروع و پایان شناسایی و جداسازی شد سپس قطعات به ناقل PET21c منتقل و در باکتری BL21 E.coli بیان شد. با تکنیک SDS-PAGE مشخص شد که این پروتئین ها بصورت اجسام نا محلول تولید شده اند. خاصیت ضد قارچی این پروتئین ها پس از تا شدن و به دست آوردن ساختار فضایی صحیح روی قارچ های Alternaria alternata و Fusarium graminearum آزمایش شد. نتایج این آزمون پس از تجزیه و تحلیل آماری با نرم افزار SAS در سطح 5% معنی دار بود.

ارتقاء امنیت وب با وف بومی